MC应用|如何使用并维护显微镜油镜?(在显微镜中使用油镜的意义)

08-24
通型生物显微镜的放大倍数可达几百倍,一般真菌和酵母菌等微生物个体较大,用低倍物镜和高倍物镜即可得到良好的效果。但要看到经染色的细菌的形态和真核生物细胞的形态构造,

通型生物显微镜的放大倍数可达几百倍,一般真菌和酵母菌等微生物个体较大,用低倍物镜和高倍物镜即可得到良好的效果。但要看到经染色的细菌的形态和真核生物细胞的形态构造,最好使用油镜头。






油镜比干燥系高倍物镜的工作距离短得多,最短的只有0.1mm,且调焦程序又不同于干燥系物镜,操作时须特别细心,防止油镜压碎标本或损坏油镜。




由于细菌体积微小,故在细菌的形态学研究中,经常需要借助显微镜油镜,才能比较清楚地进行观察,因此,必须熟练地掌握油镜的使用及保护法。




(一)油镜头的识别:


各接物镜的放大率可由其外形辨认,镜头长度越大,镜片直径越小,放大倍数大;反之,放大倍数小,油镜头长度大于低、高倍镜,镜头下缘一般刻有一圈黑线或白线,并刻有100×、1.25或oil等字样。




(二)油镜的使用法:


1、使用显微镜油镜时,必须将显微镜端正直立桌上,不得将镜臂弯曲,使载物台倾斜,以免香柏油流溢,影响观察,污染台面。




2、调焦距:


A、转动粗调节器使载物台徐徐上升(或使镜筒渐渐下降),直至油镜头浸没至油中。此时眼睛应从侧面观察,以免压碎标本片和损坏镜头。


B、将标本片放载物台上,用标本推进器固定,将欲检部分移至接物镜下,先用低倍镜找出标本的位置,然后提高镜筒,在标本的待检部位滴镜油一滴,再换油镜观察。


C、然后双眼移至接目镜,一面从接目镜观察,一面反方向缓慢地转动粗调节器(下降载物台,或上升镜筒)﹐当出现模糊物象时,换用细调节器,转动至物象清晰为止。


D、观察完毕,应先提高镜筒,并将油镜头扭向一侧,再取下标本片。油镜头使用后,应立即用擦镜纸擦净镜头上的油,若镜油粘稠干结于镜头上,可用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭镜头,并随即用干的镜纸擦去残存的二甲苯,以免二甲苯渗入,溶解用以粘固透镜的胶质物,造成镜片移位或脱落。




3、对光:


采用天然光为光源时,宜用平面反光镜;若用人工灯光时,则用凹面镜,首先打开光圈,转动反光镜,使光线集中于集光器,可根据需要上下移动集光器和缩放光圈,以获得最佳光度。




一般用低倍镜或高倍镜观察物象或用油镜检查不染色标本时,需下降集光器并适当地缩小光圈,使光度减弱;若用油镜检查染色标本时,光度宜强,应将显微镜亮度开关调至最亮,光圈完全打开,集光器上升至与载物台相平。




先在干燥系高倍物镜下找准被检物﹐并置于视野中央,然后升高镜筒约1.5cm,再把油镜头旋转至对准正下方,在玻片标本的镜检部位滴一滴浸液(镜头油),将头偏于一侧观察,下降镜筒,到物镜的前透镜与浸液接触时停止,继而从目镜里细心观察视野,旋转粗准焦螺旋,使镜筒缓慢地上升,刚出现不太清晰的物象时就换用细准焦螺旋,至物象清晰后进行观察。




初次使用油镜,也可按照干燥系物镜的调焦程序调节焦距。即先下降镜筒至物镜最接近盖玻片,但绝不能压在标本上,再上升物镜调焦。但此法有将浸液挤出去和造成空泡的缺点。若上调粗准焦螺旋时,镜筒已升到油浸镜头离开油滴,仍不能发现被检目的物,须重新调节。




油镜使用完毕,提升镜筒约2cm,把油镜转离光轴,先用擦镜纸擦去镜头上的大部分油,再用浸少量二甲苯的擦镜纸擦去镜头上的残余油迹,最后用干擦镜纸擦去镜头上的二甲苯。擦拭时要顺镜头的直径方向,不要沿镜头的圆周方向擦,玻片标本上的油也要进行清洁,即把一小张擦镜纸盖在载玻片油滴上,在纸上滴一些二甲苯,趁湿把纸往外拉,这样连续作三四次即可干净(如果是使用石蜡油,清洁时只用擦镜纸不必滴二甲苯)。




油镜使用的镜头油为香柏油或石蜡油,因香柏油黏稠度较高,使用之后擦拭较麻烦,因而许多人采用石蜡油代替使用,滴浸液时,要尽量避免气泡的形成,如果形成了气泡,可用解剖针尖将气泡排在一边,以免影响观察。




由于细菌体积微小,故在细菌的形态学研究中,经常需要借助显微镜油镜,才能比较清楚地进行观察。因此,同学们必须熟练地掌握油镜的使用及保护法。




油镜的使用原理:


油镜的透镜很小,光线通过玻片与油镜头之间的空气时,因介质密度不同,发生折射或全反射,使射入透镜的光线减少,物象显现不清;若在油镜与载玻片之间加入和玻璃折射率 (n=1.52)相近的香柏油(n=1.515),则使进入透镜的光线增多,视野亮度增强,使物象明亮清晰。






Cargille公司的浸油是唯一满足美国FDA标准的浸油产品,所有的Cargille浸油产品均满足DIN 58884标准要求。




第一款非干性浸镜油就是首先由Cargille实验室发明并且在1940年对外宣布。从此,Cargille就一直保持着该领域的龙头地位,引进第一款高粘性、低荧光性的浸镜油,完全公开的光学和 物理特性,专注于折射指数的技术服务,一流的研发实验室。人们经常忽视的非干性浸镜油的真正的优势是即使将其暴露在空气中也不会变质。




以下是多种型号浸镜油的应用指南




用于普通光学显微镜 :A型和B型几乎可以互换,彼此互溶的中级粘度。与其他类型相比,生产数量较多,并且A型和B型是最经济的。在他们之间做出选择的决定因素是您的特定应用的最佳粘度。


A型(低粘滞度):150cSt,减少积聚空气的倾向,对初学者特别有用。气泡会导致图像质量下降。


B型(高粘滞度):1250cSt,足够厚,可以用一种应用查看多张载玻片。这样可以节省批处理时间。






用于自动血液系统:使用300型,自动血液系统依赖于浸油的精确,精确控制的物理和光学特性,以便成功进行成像和机械加工。300型的设计和制造符合该设备的严格要求,包括专业的粘度和严格的控制,以保持其一致性。




用于倒置,倾斜,投影,和长焦距的仪器:使用NVH型或OVH型;盖玻片与物镜之间或载玻片与聚光镜之间的间隙越大,就越需要高粘度。NVH型21,000 cSt和OVH型46,000 cSt的极高粘度为这些应用提供了极好的结果。


NVH型


OVH型




混合油的可混溶组:可混溶的浸油组是A,B,300,NVH和OVH。用户可以轻松混合来自Miscible Group的任何两种浸油,以获得具有中等粘度的浸油,同时保持两者共有的光学性质。




用于荧光显微镜:LDF型和HF型可实现极低的荧光。FF型虽然不符合ISO标准,但实际上不含荧光。HF型比LDF型荧光稍强,但不含卤素。对于大多数非关键荧光显微镜应用,类型A和B的荧光强度很低。LDF,HF和FF型的粘度分别为500 cSt,700 cSt和170 cSt。类型A和B为150 cSt和1250 cSt。


LDF型


HF型




用于高温(> 23℃至37℃):使用37型。温度升高可能是由于台下照明器,“高温”或其他原因–是Cargille浸入油37型的理想情况。专为在人体上工作而开发体温,37型在37°C下的折射率为1.515,粘度为1250 cSt。解决了超过标准校准温度23°C时图像质量下降的问题。用户可以根据自己的工作温度进行混合;将B型在23℃时粘度为1250cSt与37型在37°C时粘度为1250 cSt共混,保持恒定的1250 cSt粘度和光学值,并将校准温度按比例放置在23°C至37°C之间。


猜你喜欢